Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synapsin IIa (m): sc-423234

Présentation

Syn2 code la synapsine IIa, une phosphoprotéine présynaptique associée aux vésicules synaptiques et à l’actine, qui régule le regroupement des vésicules, le maintien du pool de réserve et la libération de neurotransmetteurs dépendante de l’activité. La synapsine IIa est contrôlée par phosphorylation en aval de cascades de signalisation neuronale incluant la PKA, la CaMKII et la voie MAPK/ERK, reliant l’influx de calcium et les voies des seconds messagers à la plasticité synaptique. Dans des modèles murins du système nerveux, l’altération de la fonction des synapsines est utilisée pour étudier des changements de l’équilibre excitation–inhibition, de la synchronisation des réseaux et de la maturation synaptique, pertinents pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques. La perturbation de Syn2 constitue une approche aisément exploitable pour analyser des mécanismes présynaptiques influençant la stabilité des circuits et la transmission synaptique évoquée par un stimulus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synapsin IIa (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syn2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syn2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synapsin IIa.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syn2 pour l'étude de la signalisation de Synapsin IIa, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Syn2 essentiels à la fonction de Synapsin IIa
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syn2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synapsin IIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synapsin IIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syn2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synapsin IIa plasmide HDR (m) et le Synapsin IIa (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syn2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syn2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.