SUMF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406543

概要

SUMF1は、ホルミルグリシン生成酵素（FGE）をコードしています。FGEは小胞体内腔に存在する酸化酵素で、保存されたシステインをCα-ホルミルグリシンへ変換することにより、すべてのスルファターゼを翻訳後に活性化するために必須です。この修飾は、リソソームおよび細胞外における硫酸エステルの加水分解に不可欠であり、SUMF1はグリコサミノグリカンの代謝回転、スフィンゴ脂質代謝、さらにリソソーム依存的な広範な分解経路と関連づけられています。SUMF1の機能が障害されると、スルファターゼ活性が全体的に低下し、基質の除去不全や細胞内恒常性の変化を特徴とするリソソーム蓄積型の表現型を引き起こし得ます。そのためSUMF1は、スルファターゼ生物学、リソソーム機能、ならびに多発性スルファターゼ欠損症に関連する病態形成機序の研究において広く注目されています。

SUMF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSUMF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SUMF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SUMF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SUMF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SUMF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SUMF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SUMF1の機能に不可欠なSUMF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SUMF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SUMF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSUMF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SUMF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SUMF1 HDRプラスミド（h）および SUMF1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSUMF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSUMF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。