SULT2B1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424817-ACT

マウスSult2b1は、細胞質型スルホトランスフェラーゼSULT2B1をコードしており、3′-ホスホアデノシン-5′-ホスホ硫酸（PAPS）依存的に、コレステロールやオキシステロールなどのステロールを硫酸化する酵素です。SULT2B1は、活性型ステロールと硫酸化ステロールのプールのバランスを調節することで、ステロイド／ステロール代謝、脂質恒常性、ならびにLXRを含む核内受容体経路とそれに関連する転写プログラムに結び付いたシグナル伝達の節点に影響を与えます。Sult2b1の活性は、上皮組織におけるバリア脂質の生物学や、炎症シグナルおよび細胞分化を形成する免疫代謝プロセスとの関連も示されています。ステロール硫酸化動態の変化は、臨床的転帰を示唆することなく、代謝機能障害、動脈硬化に関連する機序、組織リモデリングに関する研究において重要です。

SULT2B1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sult2b1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SULT2B1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sult2b1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSult2b1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SULT2B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSult2b1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSULT2B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSult2b1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSULT2B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。