SUCLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423214

概要

Sucla2は、マウスのコハク酸CoA合成酵素（ADP形成型）のSUCLA2 βサブユニットをコードします。この酵素はミトコンドリア・マトリックスに存在し、TCA（クエン酸）回路において、スクシニルCoAをコハク酸へ可逆的に変換しつつATPを産生する反応を触媒します。この反応を通じてSUCLA2は、酸化的代謝、アナプレロティック・フラックス、ならびにTCA回路と、ヘム／ケトン体関連のスクシニルCoA利用との協調を支えます。SUCLA2の機能はミトコンドリアのエネルギー恒常性およびヌクレオチドバランスと密接に結び付いており、この経路の破綻は、SUCLA2関連ミトコンドリア疾患で報告されているミトコンドリア脳筋症様表現型やmtDNA維持異常と関連します。そのためマウスモデルにおいてSucla2は、代謝ストレス応答、神経筋系の脆弱性、そしてTCA回路酵素とミトコンドリアゲノム安定性を結び付ける機構を研究する上で重要な対象となります。

SUCLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSucla2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sucla2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sucla2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SUCLA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SUCLA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sucla2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SUCLA2の機能に不可欠なSucla2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sucla2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SUCLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSUCLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sucla2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SUCLA2 HDRプラスミド（m）および SUCLA2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSucla2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSucla2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。