Stim2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431161

Übersicht

Stim2 (stromales Interaktionsmolekül 2) ist ein Ca2+-Sensor des endoplasmatischen Retikulums, der die Entleerung der Ca2+-Speicher im ER mit dem speicheroperierten Calciumeinstrom (SOCE) koppelt, indem er an Kontaktstellen zwischen ER und Plasmamembran die Aktivität von Orai-Kanälen reguliert. In Mauszellen trägt STIM2 zur Aufrechterhaltung basaler zytosolischer Ca2+-Spiegel bei und stimmt Amplitude und Dauer Ca2+-abhängiger Signale ab, die die NFAT-gesteuerte Transkription, synaptische Funktionen und Programme der Aktivierung von Immunzellen beeinflussen. Über diese Calcium-Signalnetzwerke ist Stim2 mit Prozessen wie neuronaler Erregbarkeit und Plastizität, Zytokinantworten und der Anpassung an zellulären Stress verknüpft. Eine Fehlregulation von SOCE und STIM2-abhängiger Signalübertragung wurde mit krankheitsrelevanten Mechanismen wie Neuroinflammation, Autoimmunität und veränderten Signalwegen des Zellüberlebens in Verbindung gebracht, wodurch Stim2 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien ist.

Das Stim2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stim2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stim2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stim2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Stim2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stim2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Stim2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stim2-Exone abzielen, die für die Stim2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stim2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Stim2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Stim2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stim2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Stim2 HDR-Plasmid (m) und Stim2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stim2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stim2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.