Stat5a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r): sc-437303
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Stat5a Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Stat5a-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Stat5a: sc-271542
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Stat5a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) | sc-437303 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
STAT5A (Signaltransduktor und Aktivator der Transkription 5A) ist ein latenter zytoplasmatischer Transkriptionsfaktor, der nachgeschaltet von JAK-Kinasen als Antwort auf Zytokine und Wachstumsfaktoren aktiviert wird, darunter Prolaktin, Wachstumshormon und Interleukine. Nach der Phosphorylierung dimerisiert Stat5a, transloziert in den Zellkern und reguliert Genprogramme, die Proliferation, Differenzierung, Überleben und die metabolische Homöostase in verschiedenen Geweben steuern. In Rattenmodellen trägt die Stat5a-Signalgebung zur Regulation hämatopoetischer Zelllinien sowie zu hormonresponsiven transkriptionellen Netzwerken bei und ist damit relevant für Studien zu Immunfehlregulation, entzündungsassoziierten Phänotypen und hormonabhängigem Remodeling. Eine Störung der STAT5A-Aktivität wird häufig eingesetzt, um die Verschaltung des JAK/STAT-Signalwegs und das transkriptionelle Cross-Talk mit der MAPK- und PI3K-Signalgebung zu untersuchen.
Das Stat5a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in rat-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Stat5a-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Stat5a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die Stat5a-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Stat5a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) und vom Stat5a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Stat5a HDR-Plasmid (r) und Stat5a HDR-Plasmid (r2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.