SREBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423152

Übersicht

Srebf1 kodiert das Sterol-regulatorische Element-bindende Protein 1 (SREBP-1), einen membranverankerten Transkriptionsfaktor, der durch proteolytische Spaltung aktiviert wird und Programme des Lipid- und Kohlenhydratstoffwechsels steuert. In Mauszellen treibt SREBP-1 die Expression von Enzymen an, die für die de-novo-Synthese von Fettsäuren und Triglyceriden erforderlich sind, und verknüpft Nährstoff- und Hormonsignale über SREBP-abhängige Transkriptionsregulation mit lipogenen Gen-Netzwerken. Dieser Signalweg ist mit der Insulin- und mTOR-Signalgebung, der ER-Homöostase und der Membranbiogenese vernetzt und beeinflusst die Adipogenese sowie das metabolische Remodeling von Hepatozyten. Eine dysregulierte SREBP-1-Aktivität wird häufig als mechanistische Achse in Modellen der hepatischen Steatose, der adipositasassoziierten Insulinresistenz und der lipidgetriebenen Entzündung herangezogen.

Das SREBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Srebf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Srebf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Srebf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SREBP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Srebf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SREBP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Srebf1-Exone abzielen, die für die SREBP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Srebf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SREBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SREBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Srebf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SREBP-1 HDR-Plasmid (m) und SREBP-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Srebf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Srebf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.