SR-2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401532

Übersicht

HTR2A kodiert den humanen 5‑Hydroxytryptamin‑Rezeptor 2A (SR‑2A), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der überwiegend an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase‑C‑Signalgebung, den Inositphosphat‑Umsatz, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca²⁺ sowie die Aktivierung der Proteinkinase C stimuliert. SR‑2A moduliert die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität und ist über Crosstalk mit MAPK/ERK und verwandten Second‑Messenger‑Signalwegen in breitere Neurotransmitter‑Netzwerke eingebunden. Veränderungen der Expression und Signalübertragung von HTR2A werden häufig im Zusammenhang mit neuropsychiatrischen Phänotypen untersucht, darunter eine veränderte serotonerge Tonuslage und eine rezeptorvermittelte Funktion kortikaler Schaltkreise. Als Membranrezeptor mit komplexer regulatorischer Dynamik stellt SR‑2A einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um in humanen Zellmodellen signalwegspezifische Signalgebung sowie Mechanismen der Rezeptor‑Desensibilisierung und ‑Internalisierung zu analysieren.

Das SR-2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HTR2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HTR2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HTR2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SR-2A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HTR2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SR-2A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HTR2A-Exone abzielen, die für die SR-2A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HTR2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SR-2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SR-2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HTR2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SR-2A HDR-Plasmid (h) und SR-2A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HTR2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HTR2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.