Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPUVE (h): sc-406568

Présentation

PRSS23 code la protéase à sérine SPUVE, une enzyme de type trypsine impliquée dans la protéolyse péricellulaire et le remodelage du milieu extracellulaire. L’activité de SPUVE a été associée à la régulation du comportement des cellules épithéliales et stromales, notamment la migration, l’adhésion et des programmes de différenciation, en interaction avec la signalisation activée par les protéases et la dynamique de la matrice extracellulaire. Des études d’expression et de fonction relient PRSS23 à des contextes hormonodépendants et inflammatoires, ce qui suggère un rôle dans le remodelage tissulaire et des phénotypes de croissance dérégulée. Ces propriétés font de PRSS23 une cible utile pour disséquer les voies dépendantes des protéases qui influencent les transitions d’état cellulaire et les interactions avec le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPUVE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRSS23 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRSS23, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRSS23 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPUVE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRSS23 pour l'étude de la signalisation de SPUVE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRSS23 essentiels à la fonction de SPUVE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRSS23 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPUVE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPUVE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRSS23. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPUVE plasmide HDR (h) et le SPUVE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRSS23 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRSS23 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.