SPRED2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404738

概要

SPRED2（sprouty related EVH1 domain containing 2）は、細胞質に存在するアダプタータンパク質をコードしており、Ras–Raf–MEK–ERK/MAPKカスケードを阻害することで受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達を負に制御します。Rafやニューロフィブロミンなどの構成要素との相互作用を介して、SPRED2は増殖因子によって駆動される増殖・分化・炎症性シグナルを抑え、細胞応答の恒常性維持に寄与します。SPRED2の発現や機能の変化は、がんにおけるMAPK活性の異常亢進や、免疫・炎症過程（異常なサイトカイン／ケモカインシグナルを伴う状況を含む）との関連が報告されています。シグナル経路の「ブレーキ」として、SPRED2はRTK下流、ならびにERKへ収束する他の上流入力におけるシグナルの強度や持続時間の調節に果たす役割が、しばしば研究されています。

SPRED2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPRED2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPRED2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPRED2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPRED2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPRED2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPRED2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPRED2の機能に不可欠なSPRED2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPRED2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPRED2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPRED2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPRED2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPRED2 HDRプラスミド（h）および SPRED2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPRED2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPRED2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。