SPLUNC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406336

Übersicht

BPIFA2 kodiert SPLUNC2, ein sezerniertes Mitglied der Familie der BPI-Fold-enthaltenden Proteine, das in Epithelien der oberen Atemwege und der Speicheldrüsen exprimiert wird. SPLUNC2 trägt zur angeborenen mukosalen Abwehr bei, indem es mit mikrobiellen Komponenten interagiert und die Homöostase der Flüssigkeit auf der Atemwegsoberfläche beeinflusst, wodurch die Funktion der epithelialen Barriere mit inflammatorischen Signalprogrammen verknüpft wird. Aufgrund seiner Rolle in Wirt–Mikroben-Interaktionen und der Modulation lokaler Immunantworten wird BPIFA2 häufig in Studien zu Entzündungen der Atemwege, Infektanfälligkeit und epithelialem Remodelling untersucht. Eine veränderte BPIFA2/SPLUNC2-Expression wurde mit Phänotypen von Atemwegserkrankungen in Verbindung gebracht und dient als molekularer Readout in Modellen sinonasaler und pulmonaler Entzündungszustände.

Das SPLUNC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BPIFA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BPIFA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BPIFA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPLUNC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BPIFA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPLUNC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BPIFA2-Exone abzielen, die für die SPLUNC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BPIFA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPLUNC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPLUNC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BPIFA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPLUNC2 HDR-Plasmid (h) und SPLUNC2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BPIFA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BPIFA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.