SphK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423102

Panoramica

Sphk1 codifica la sfingosina chinasi 1 (SphK1), una chinasi lipidica chiave che fosforila la sfingosina generando sfingosina-1-fosfato (S1P), modulando così l’equilibrio tra S1P pro‑sopravvivenza e i pool pro‑apoptotici di ceramide/sfingosina. La segnalazione dell’S1P guidata da SphK1 interseca le vie dei GPCR e dei recettori tirosina-chinasici, influenzando MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF‑κB, i flussi di calcio e il rimodellamento del citoscheletro, che nel complesso regolano proliferazione, resistenza all’apoptosi, migrazione e risposte infiammatorie. Nei sistemi murini, SphK1 è ampiamente utilizzata per studiare il metabolismo degli sfingolipidi bioattivi nella regolazione immunitaria, nella biologia vascolare e nelle risposte allo stress, inclusi modelli di infiammazione, fibrosi e fenotipi correlati al cancro. Un’attività alterata dell’asse SPHK1/S1P è frequentemente associata a produzione di citochine deregolata, alterazioni della funzione di barriera e segnalazione tumorale, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SphK1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sphk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sphk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sphk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SphK1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sphk1 per lo studio della segnalazione di SphK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sphk1 critici per la funzione di SphK1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sphk1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SphK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SphK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sphk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SphK1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SphK1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sphk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sphk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.