Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-3 (h): sc-403896

Présentation

SOX3 code Sox-3, un facteur de transcription à domaine HMG-box qui se lie à l’ADN et module des programmes d’expression génique dépendants de la chromatine, indispensables à la spécification précoce du neuroectoderme et au maintien de l’identité des progéniteurs neuraux. Sox-3 agit au sein de réseaux régulateurs développementaux centraux aux côtés d’autres facteurs de la famille SOX, en influençant des voies qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation dans le système nerveux central en développement et l’axe hypophyso-hypothalamique. Des altérations du dosage de SOX3 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des troubles du développement hypothalamo-hypophysaire, soulignant sa pertinence pour l’étude du contrôle transcriptionnel au cours du développement humain. En recherche, SOX3 est fréquemment étudié pour son rôle dans l’engagement de lignée, les modèles de différenciation neurale et l’architecture des réseaux de facteurs de transcription.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SOX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SOX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SOX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sox-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SOX3 pour l'étude de la signalisation de Sox-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SOX3 essentiels à la fonction de Sox-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SOX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sox-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sox-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SOX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sox-3 plasmide HDR (h) et le Sox-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SOX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SOX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.