Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNARK (h): sc-405079
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SNARK Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SNARK, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SNARK Antibody (C-12): sc-374348
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNARK (h) | sc-405079 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NUAK2 code pour SNARK (SNF1/AMPK-related kinase), une kinase sérine/thréonine de la famille des kinases apparentées à l’AMPK, qui relie l’état énergétique cellulaire à des programmes de signalisation adaptatifs. SNARK est activée en aval de LKB1/STK11 et participe à des réseaux de phosphorylation qui influencent le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que la régulation métabolique en réponse au stress. Les fonctions rapportées relient NUAK2 à des voies gouvernant la transition épithélio-mésenchymateuse, les sorties transcriptionnelles associées à Hippo/YAP, et un contrôle dépendant du contexte de la prolifération et de la survie. Une activité NUAK2/SNARK dérégulée a été associée à la biologie des cancers et à des phénotypes invasifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du couplage métabolisme–motilité.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNARK (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NUAK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NUAK2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NUAK2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNARK.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NUAK2 pour l'étude de la signalisation de SNARK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NUAK2 essentiels à la fonction de SNARK
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NUAK2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SNARK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SNARK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NUAK2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SNARK plasmide HDR (h) et le SNARK (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NUAK2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NUAK2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.