SMP30 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401934-ACT

ヒトRGNは、老化マーカータンパク質30（SMP30）をコードしており、細胞老化、酸化ストレス応答、カルシウム恒常性に関与する多機能な細胞質タンパク質である。SMP30は、活性酸素種（ROS）の処理調節、肝細胞の代謝、ならびにストレス下での膜安定性の維持に関与するとされ、細胞生存や組織のレジリエンスに影響する経路と統合的に連動している。SMP30発現の変化は、肝臓を含む各組織における加齢に伴う機能低下や代謝調節異常と関連づけられており、RGNは老化関連表現型の機序研究に有用な結節点となる。保存性の高いストレス応答因子として、SMP30は炎症、レドックス不均衡、細胞恒常性破綻のモデルで頻繁に検討されている。

SMP30 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RGNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMP30 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RGN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRGN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMP30の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRGN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMP30依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRGN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMP30経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。