Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SLPI Double Nickase Plasmid (h): sc-418559-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLPI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLPI Double-Nickase-Plasmid (h) und SLPI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLPI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SLPI: sc-373802
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLPI Double Nickase Plasmid (h) | sc-418559-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLPI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418559-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der sekretorische Leukozyten-Peptidase-Inhibitor (SLPI) ist ein kleines, sezerniertes Serinprotease-Inhibitorprotein, das zur Aufrechterhaltung der Homöostase epithelialer und mukosaler Barrieren beiträgt, indem es die Aktivität von neutrophiler Elastase, Cathepsin G und verwandten Proteasen begrenzt. Über seine Antiprotease-Funktion hinaus kann SLPI die Signalwege der angeborenen Immunität und die Expression entzündungsassoziierter Gene modulieren und dadurch Prozesse wie Wundheilung, antimikrobielle Abwehr und die Rekrutierung von Leukozyten beeinflussen. Eine veränderte SLPI-Expression wurde bei entzündlichen Erkrankungen der Atemwege und der Haut, bei chronischen Schleimhautentzündungen sowie bei infektionsassoziiertem Gewebeumbau beschrieben, was SLPI zu einem nützlichen molekularen Knotenpunkt für die Untersuchung des Protease–Antiprotease-Gleichgewichts macht. SLPI ist daher relevant für die Forschung zu Epithelbiologie, Immunregulation und mikroenvironmentalen Faktoren, die krankheitsassoziierte Entzündungen prägen.
SLPI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLPI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLPI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLPI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLPI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.