Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLMAP (m2): sc-429965-KO-2

Présentation

Slmap code la protéine associée au sarcolemme (SLMAP), une protéine membranaire à ancrage C‑terminal (« tail-anchored ») enrichie au niveau de membranes intracellulaires, notamment le sarcolemme, le réticulum endoplasmique et l’enveloppe nucléaire. SLMAP participe à l’organisation et au trafic des membranes, à la signalisation des jonctions et au couplage avec le cytosquelette, et a été impliquée dans la régulation de la fonction du centrosome et de la progression du cycle cellulaire. Dans les tissus excitables, SLMAP est associée à des microdomaines de canaux ioniques et de gestion du calcium qui soutiennent l’activité électrique et l’homéostasie contractile. Des altérations de l’expression ou de la localisation de SLMAP ont été associées à des phénotypes de conduction cardiaque et à des mécanismes liés à la cardiomyopathie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’architecture membranaire et de l’électrophysiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLMAP (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slmap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slmap, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slmap à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLMAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slmap pour l'étude de la signalisation de SLMAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slmap essentiels à la fonction de SLMAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slmap pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLMAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SLMAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slmap. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLMAP plasmide HDR (m) et le SLMAP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slmap pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slmap définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.