SLC35A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423599

Descripción general

Slc35a2 codifica SLC35A2, un transportador de UDP-galactosa residente en el Golgi que importa sustratos de azúcares nucleótidos a la vía secretora para sostener la galactosilación de glicoproteínas y glicolípidos. Al regular la maduración de los glicanos, SLC35A2 influye en el plegamiento proteico, el tráfico vesicular, la adhesión célula–célula y la señalización de receptores, con efectos posteriores en vías que dependen de una glicosilación superficial adecuada. La alteración del transporte de UDP-galactosa puede modificar la homeostasis del RE/Golgi y la función de proteínas de membrana, afectando procesos como el desarrollo neuronal y las interacciones de las células inmunitarias. La glicosilación desregulada vinculada a SLC35A2 se ha asociado con trastornos congénitos de la glicosilación y con fenotipos más amplios que implican el neurodesarrollo y la función del tejido epitelial, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC35A2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc35a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc35a2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc35a2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC35A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc35a2 para la investigación de la señalización de SLC35A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc35a2 críticos para la función de SLC35A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc35a2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC35A2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SLC35A2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc35a2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC35A2 (m) y el plásmido HDR SLC35A2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc35a2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc35a2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.