SLC25A29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406645

Übersicht

SLC25A29 (Solute-Carrier-Familie 25, Mitglied 29) kodiert einen Carrier der inneren Mitochondrienmembran, der am Transport basischer Aminosäuren – insbesondere Arginin – in die mitochondriale Matrix beteiligt ist, um den Stofffluss durch das mit dem Harnstoffzyklus verknüpfte Arginin/Ornithin-Netzwerk sowie den NO-(Stickstoffmonoxid)-assoziierten Metabolismus zu unterstützen. Indem SLC25A29 die intramitochondriale Verfügbarkeit von Aminosäuren mitbestimmt, kann es die mitochondriale Atmung, das Redoxgleichgewicht und biosynthetische Signalwege beeinflussen, die von Ein-Kohlenstoff- und Stickstoffmetabolismus abhängen. Veränderte Expression oder Aktivität mitochondrialer SLC25-Carrier wird häufig mit metabolischer Umprogrammierung und mitochondrialer Dysfunktion in unterschiedlichsten Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was SLC25A29 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien des mitochondrialen Aminosäuretransports macht. Forschung zu SLC25A29 liefert zudem Erkenntnisse darüber, wie die mitochondriale Substratverteilung zelluläre Stressantworten und die Energiehomöostase beeinflusst.

Das SLC25A29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A29-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A29-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A29 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC25A29-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A29-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC25A29-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A29-Exone abzielen, die für die SLC25A29-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A29-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC25A29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLC25A29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A29-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC25A29 HDR-Plasmid (h) und SLC25A29 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A29-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A29-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.