Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ski (m): sc-422964
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Ski Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Ski, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ski Antibody (G8): sc-33693
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ski (m) | sc-422964 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ski code l’oncoprotéine Ski, un corégulateur nucléaire de la transcription qui module des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Dans les cellules murines, Ski est surtout connu pour antagoniser la signalisation TGF-β/SMAD en interagissant avec les complexes SMAD et des corépresseurs, façonnant ainsi la transition épithélio-mésenchymateuse, le dépôt de matrice extracellulaire et la différenciation. Par ces effets sur les voies de signalisation, Ski influence la prolifération, l’engagement de lignée et le remodelage tissulaire, des processus souvent perturbés dans les anomalies du développement et les phénotypes associés au cancer. Ses fonctions régulatrices font de Ski un nœud d’étude pertinent pour la transcription dépendante des signaux, la répression associée à la chromatine et le contrôle de la croissance spécifique au contexte.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ski (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ski dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ski, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ski à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ski.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ski pour l'étude de la signalisation de Ski, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ski essentiels à la fonction de Ski
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ski pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Ski plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ski plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ski. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Ski plasmide HDR (m) et le Ski (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ski pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ski définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.