SIRT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400675-ACT

ヒトSIRT3は、ミトコンドリアに局在するNAD+依存性デアセチラーゼをコードしており、タンパク質のアセチル化を調節することで、酸化的代謝、ミトコンドリア生合成、ならびにレドックス恒常性を協調的に制御します。脂肪酸酸化、TCA回路、電子伝達系の機能に関与する標的を脱アセチル化することにより、SIRT3はATP産生、ROSの解毒、さらにマイトファジーなどのミトコンドリア品質管理経路に影響を与えます。SIRT3活性は、栄養感知とストレス応答を細胞の生存プログラムへと結び付け、AMPK/PGC-1αシグナル伝達や、SOD2依存的なROS緩衝を含む抗酸化防御に下流効果を及ぼします。SIRT3の発現や活性の破綻は、代謝疾患の病態生物学、神経変性研究、がん代謝研究に関連するミトコンドリア機能障害の表現型と関連付けられています。

SIRT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIRT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SIRT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIRT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIRT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SIRT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIRT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSIRT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIRT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSIRT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。