SIRP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401201

概要

シグナル制御タンパク質α（SIRP-α）はヒトSIRPA遺伝子にコードされる免疫グロブリンスーパーファミリーの膜貫通受容体で、自然免疫の活性化を調節する分子として主に骨髄系細胞に高発現しています。SIRP-αは、細胞質側のITIMモチーフのリン酸化とSHP-1／SHP-2ホスファターゼのリクルートを介して、CD47との結合下流で抑制性シグナルを伝達し、細胞骨格ダイナミクス、貪食、接着、サイトカイン応答を制御します。このCD47–SIRP-α軸は炎症性微小環境におけるマクロファージや樹状細胞の挙動を規定し、腫瘍の免疫逃避、慢性炎症、骨髄系機能の異常との関連が示唆されています。そのためSIRPAは、免疫恒常性、抗原提示細胞機能、細胞間認識を制御する経路の研究で広く解析されています。

SIRP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSIRPA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SIRPA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SIRPAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SIRP-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SIRP-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SIRPA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SIRP-αの機能に不可欠なSIRPAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SIRPAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SIRP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSIRP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SIRPA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SIRP-α HDRプラスミド（h）および SIRP-α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSIRPAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSIRPA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。