Sigma Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400615-ACT

O gene humano **SIGMAR1** codifica o **receptor sigma-1** (Sigma Receptor), uma chaperona residente no retículo endoplasmático (RE) e associada às membranas associadas à mitocôndria (MAM) que modula a troca interorganelar de Ca²⁺, a homeostase lipídica e a proteostase durante o estresse celular. O SIGMAR1 influencia os desfechos de sinalização decorrentes do fluxo de Ca²⁺ dependente do IP3R, das vias de estresse do RE/UPR e da bioenergética mitocondrial, moldando assim a função sináptica, a manutenção de neuritos e programas de sobrevivência celular. Por meio de interações com canais iônicos, componentes de sinalização de GPCRs e reguladores redox, o Sigma Receptor integra a adaptação ao estresse com a neurotransmissão e a regulação metabólica. A desregulação de processos associados ao SIGMAR1 tem sido relacionada à neurodegeneração e a fenótipos neuropáticos, sustentando sua utilidade em estudos mecanísticos de falha de proteostase e disfunção mitocondrial.

Sigma Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIGMAR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sigma Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIGMAR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIGMAR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sigma Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIGMAR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sigma Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sigma Receptor em células tumorais com expressão de SIGMAR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.