SIAE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423745

Übersicht

Die Maus SIAE (Sialinsäure-Acetylesterase) kodiert eine lysosomale/sekretierte Esterase, die O‑Acetylgruppen von Sialinsäuren entfernt und dadurch Glykanstrukturen auf Glykoproteinen und Glykolipiden umgestaltet. Durch die Regulation des Acetylierungszustands sialylierter Liganden beeinflusst SIAE lektinvermittelte Erkennungsereignisse und nachgeschaltete Signalwege an der Zelloberfläche, was für die Homöostase von Immunzellen von großer Bedeutung ist. Veränderte Sialinsäure-Modifikationen werden mit Änderungen der Signalschwellen des B‑Zell-Rezeptors, von Toleranz-Kontrollpunkten und von Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht, wodurch Siae ein nützliches Ziel in Studien zu Autoimmunität und Immunfehlregulation darstellt. SIAE-abhängiges Glykan-Editing überschneidet sich zudem mit Signalwegen, die die endosomale/lysosomale Prozessierung und den Rezeptortransport steuern, und unterstützt damit Untersuchungen in der Glykobiologie und im Immunmetabolismus.

Das SIAE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Siae-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Siae-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Siae nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SIAE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Siae-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SIAE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Siae-Exone abzielen, die für die SIAE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Siae-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SIAE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SIAE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Siae-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SIAE HDR-Plasmid (m) und SIAE HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Siae-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Siae-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.