SHISA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432346

Descripción general

Shisa2 codifica SHISA2, una proteína transmembrana de paso único de la familia Shisa que puede modular el tráfico y la maduración de receptores de la superficie celular, influyendo así en la disponibilidad de dichos receptores y en la señalización posterior. En células de ratón, SHISA2 se ha vinculado a la regulación de programas de desarrollo y diferenciación, con funciones descritas en el control de la capacidad de respuesta de las vías WNT y FGF mediante efectos sobre el procesamiento de receptores. Al ajustar la intensidad de la señalización mediada por receptores, SHISA2 puede afectar las transiciones epitelio‑mesénquima, la morfogénesis tisular y la estabilidad del estado celular. En la literatura, la expresión o función desregulada de SHISA2 se ha asociado con redes de señalización de factores de crecimiento alteradas, relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos caracterizados por diferenciación aberrante y reconfiguración de la señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SHISA2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Shisa2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Shisa2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Shisa2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SHISA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Shisa2 para la investigación de la señalización de SHISA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Shisa2 críticos para la función de SHISA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Shisa2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SHISA2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SHISA2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Shisa2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SHISA2 (m) y el plásmido HDR SHISA2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Shisa2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Shisa2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.