Plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank 3 (m): sc-425500
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Shank 3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Shank 3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Shank 3 Antibody (C-4): sc-377088
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank 3 (m) | sc-425500 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Shank3 code Shank 3, une protéine d’échafaudage multidomaine concentrée dans les densités postsynaptiques excitatrices, où elle organise les synapses glutamatergiques en couplant les récepteurs et les enzymes de signalisation au cytosquelette d’actine. Grâce à ses interactions avec les complexes PSD-95/GKAP/Homer, Shank 3 favorise la maturation synaptique, la morphogenèse des épines dendritiques et la plasticité dépendante de l’activité, en intégrant des voies telles que la signalisation des mGluR, les cascades CaMK/ERK et le remodelage du cytosquelette. Chez la souris, la fonction de Shank3 est largement utilisée pour étudier les mécanismes d’homéostasie synaptique et de connectivité des circuits à l’origine de phénotypes neurodéveloppementaux. La perturbation des réseaux associés à SHANK3 est liée à la biologie des troubles du spectre de l’autisme et au syndrome de Phelan–McDermid, ce qui en fait une cible clé pour la modélisation des synaptopathies dans des systèmes expérimentaux.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Shank3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Shank3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Shank3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Shank 3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Shank3 pour l'étude de la signalisation de Shank 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Shank3 essentiels à la fonction de Shank 3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Shank3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Shank 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Shank 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Shank3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Shank 3 plasmide HDR (m) et le Shank 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Shank3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Shank3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.