Shank 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425500

概要

Shank3 は、興奮性シナプス後肥厚部（excitatory postsynaptic density: PSD）に高濃度に局在する多ドメイン型の足場（スキャフォールド）タンパク質 Shank 3 をコードし、受容体やシグナル伝達酵素をアクチン細胞骨格へ連結することで、グルタミン酸作動性シナプスの構築を組織化します。Shank 3 は PSD-95/GKAP/Homer 複合体との相互作用を介して、シナプス成熟、スパイン形態形成、活動依存的可塑性を支え、mGluR シグナル伝達、CaMK/ERK カスケード、細胞骨格リモデリングなどの経路を統合します。マウスでは、Shank3 の機能は、神経発達関連表現型の基盤となるシナプス恒常性や回路接続性の機構を研究するために広く用いられています。SHANK3 関連ネットワークの破綻は、自閉スペクトラム症（ASD）関連の生物学およびフェラン・マクダーミド症候群と結び付けられており、実験系でシナプス病（synaptopathy）をモデル化する上で重要な標的となっています。

Shank 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるShank3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Shank3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Shank3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Shank 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Shank 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Shank3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Shank 3の機能に不可欠なShank3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Shank3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Shank 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびShank 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Shank3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Shank 3 HDRプラスミド（m）および Shank 3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはShank3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のShank3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。