SETD2 Plasmide Double Nickase (m): sc-433485-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SETD2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SETD2 Double Nickase Plasmid (m) e il SETD2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Setd2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SETD2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-433485-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SETD2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-433485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Setd2* codifica SETD2, l’unica metiltransferasi responsabile della trimetilazione di H3K36 (H3K36me3) sulla cromatina attivamente trascritta, collegando l’allungamento trascrizionale alla regolazione epigenetica. Questo marcatore coordina la maturazione dell’RNA co-trascrizionale, la riparazione degli appaiamenti errati del DNA e la stabilità del genoma, e favorisce anche l’interazione con le vie di risposta al danno al DNA durante lo stress replicativo. Gli stati della cromatina dipendenti da SETD2 influenzano lo splicing alternativo e il reclutamento di fattori di riparazione nei siti di rotture a doppio filamento. La disregolazione dell’attività di SETD2 e dei pattern di H3K36me3 è associata alla biologia tumorale e a programmi di differenziamento alterati, rendendo *Setd2* un bersaglio chiave per studi meccanicistici in epigenetica e nel mantenimento del genoma.
SETD2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Setd2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Setd2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Setd2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Setd2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.