Septin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406325

Übersicht

SEPT3 kodiert Septin 3, ein GTP-bindendes Zytoskelettprotein aus der Septin-Familie, das sich zu hetero-oligomeren Filamenten und ringförmigen Strukturen zusammenlagert, um Membrandomänen zu organisieren. Septin 3 trägt zu aktin- und mikrotubuliassoziierten Prozessen bei, darunter Vesikeltransport, Neuritenauswachsen sowie die räumliche Kontrolle von Zytokinese und Zellpolarität, indem es als Gerüstprotein und Diffusionsbarriere wirkt. Im Nervensystem ist die SEPT3-Expression in Neuronen angereichert und wurde mit der Regulation synaptischer Architektur und Vesikeldynamik in Verbindung gebracht, wodurch ein Bezug zu Signalwegen entsteht, die neuronale Differenzierung und synaptische Transmission steuern. Eine fehlregulierte Organisation des Septin-Netzwerks und SEPT3-assoziierte Veränderungen wurden in Studien zu Neurodegeneration und Tumorbiologie beschrieben, was seinen Nutzen als mechanistischer Knotenpunkt in der Forschung zur Umgestaltung von Zytoskelett und Membranen unterstreicht.

Das Septin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SEPT3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SEPT3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SEPT3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Septin 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SEPT3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Septin 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SEPT3-Exone abzielen, die für die Septin 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SEPT3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Septin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Septin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SEPT3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Septin 3 HDR-Plasmid (h) und Septin 3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SEPT3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SEPT3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.