Plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 2 (m): sc-421849

Présentation

Le gène murin **Sept2** code la septine 2, une protéine cytosquelettique centrale liant le GTP, qui s’assemble en filaments de septines hétéro-oligomériques et en structures en anneau afin d’organiser l’architecture cellulaire. La septine 2 coordonne la cytocinèse, le remodelage membranaire et le trafic vésiculaire, et elle interagit avec les réseaux d’actine et de microtubules pour soutenir la croissance polarisée et la compartimentation intracellulaire. L’échafaudage dépendant de Sept2 contribue à des processus tels que la formation du corps intermédiaire (midbody), la croissance des neurites et l’organisation de la barrière épithéliale, reliant la dynamique des septines aux voies qui régissent la division cellulaire et la morphogenèse. Une organisation dérégulée des septines a été associée à une mitose aberrante et à une signalisation cytosquelettique altérée, ce qui fait de Sept2 un point d’entrée utile pour étudier des mécanismes pertinents pour la biologie tumorale et des phénotypes neurodéveloppementaux dans des modèles expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sept2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sept2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sept2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Septin 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sept2 pour l'étude de la signalisation de Septin 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sept2 essentiels à la fonction de Septin 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sept2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Septin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Septin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sept2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Septin 2 plasmide HDR (m) et le Septin 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sept2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sept2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.