Septin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421849

概要

マウスSept2は、セプチン2をコードする遺伝子であり、GTP結合性をもつ細胞骨格の中核タンパク質です。セプチン2は、異種オリゴマー性のセプチンフィラメントやリング状構造を形成して細胞構築を組織化します。さらに、細胞質分裂、膜リモデリング、小胞輸送を制御し、アクチンおよび微小管ネットワークと連携することで、極性成長や細胞内区画化を支えます。Sept2依存的な足場形成は、ミッドボディ形成、神経突起伸長、上皮バリアの構築などの過程に寄与し、セプチン動態を細胞分裂や形態形成を司る経路と結び付けています。セプチンの組織化異常は、異常な有糸分裂や細胞骨格シグナルの変化と関連づけられており、Sept2は、腫瘍生物学や神経発達に関わる表現型に関連した機構を実験モデルで研究するうえで有用な結節点となります。

Septin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSept2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sept2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sept2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Septin 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Septin 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sept2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Septin 2の機能に不可欠なSept2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sept2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Septin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSeptin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sept2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Septin 2 HDRプラスミド（m）および Septin 2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSept2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSept2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。