SEMA5A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422885

Descripción general

Sema5a codifica la señal de guía transmembrana SEMA5A, un miembro de la familia de las semaforinas que regula el guiado axonal, la migración neuronal y la formación de sinapsis mediante señalización mediada por receptores que remodela el citoesqueleto. Además de sus funciones en el sistema nervioso, SEMA5A contribuye a programas de adhesión y motilidad celular en múltiples tejidos, intersectando con vías que determinan el movimiento direccional y el patrón tisular. La alteración de la expresión o la señalización de SEMA5A se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y se ha estudiado en contextos que implican conectividad aberrante y microambientes inflamatorios. En modelos murinos, la perturbación de Sema5a se utiliza para dilucidar mecanismos de ensamblaje de circuitos y para vincular la señalización de guía con cambios en el estado celular durante el desarrollo y procesos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA5A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema5a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema5a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema5a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA5A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema5a para la investigación de la señalización de SEMA5A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema5a críticos para la función de SEMA5A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema5a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA5A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA5A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema5a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA5A (m) y el plásmido HDR SEMA5A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema5a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema5a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.