SEMA4F CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422884

概要

Sema4f は、マウスのセマフォリン SEMA4F をコードしており、細胞間コミュニケーションと組織の空間的配置の調整を助ける膜貫通型のガイダンス因子である。SEMA4F はプレキシン／ニューロピリンを介したシグナル伝達に関与し、Rho ファミリー GTPase とその下流のアクチン制御へ収束する経路を通じて、細胞骨格ダイナミクス、神経突起伸長、軸索誘導、ならびにシナプス関連のリモデリングを調節する。神経系の発生と可塑性に加えて、セマフォリンシグナルは多様な微小環境における免疫細胞の局在化や遊走挙動にも寄与する。セマフォリン—プレキシンのネットワークの破綻は神経発達および神経炎症に関連する表現型に関与すると示唆されており、Sema4f はマウスモデルにおけるガイダンスおよび運動性プログラムを解析する上で有用なノードとなる。

SEMA4F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema4f遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema4f内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema4fのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA4Fタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA4Fシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema4f欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA4Fの機能に不可欠なSema4fエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema4fゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA4F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA4F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema4f遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA4F HDRプラスミド（m）および SEMA4F HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema4fホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema4f標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。