SELH CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415276-ACT

ヒトのSELENOHは、セレノプロテインH（SELH）をコードしており、チオール依存性の抗酸化プロセスを介して細胞のレドックス恒常性の維持に関与するとされる、レドックス活性をもつ核関連タンパク質です。SELHは酸化ストレスに対する細胞応答に寄与し、レドックス負荷下でDNAの健全性、ミトコンドリア機能、プロテオスタシスに影響を与える転写プログラムを支持します。セレン代謝を活性酸素種（ROS）の制御へと結び付ける、より広範なセレノプロテイン・ネットワークの一部として、SELH活性の変化は、酸化シグナル伝達やストレス適応が破綻する神経変性、代謝機能障害、腫瘍生物学の基盤機序に関連します。

SELH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SELENOHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SELH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SELENOH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSELENOH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SELHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSELENOH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSELH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSELENOH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSELH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。