Selenoprotein S CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404444-ACT

SELENOSはセレノプロテインSをコードする遺伝子であり、セレノプロテインSは小胞体（ER）膜に存在するセレン含有タンパク質です。ミスフォールド（誤った立体構造）したタンパク質の除去を促進することで、小胞体関連分解（ERAD）とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持を支えます。ERストレスシグナル伝達とレドックス恒常性の調節を介して、セレノプロテインSはアンフォールドタンパク質応答（UPR）経路や炎症シグナルの出力に影響します。SELENOSの発現量の違いは、サイトカイン産生の変化や、代謝・免疫関連の表現型に対する感受性と関連づけられており、酸化ストレスと炎症の接点における役割を反映しています。ERの品質管理に関与するヒト遺伝子として、SELENOSは慢性ストレスへの適応、マクロファージ活性化、ならびにプロテオトキシック（タンパク質毒性）な侵襲に対する細胞応答といった文脈で頻繁に研究されています。

Selenoprotein S CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SELENOSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Selenoprotein S CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SELENOS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSELENOS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Selenoprotein Sの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSELENOS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSelenoprotein S依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSELENOS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSelenoprotein S経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。