Sec61β CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402791-ACT

SEC61Bは、翻訳と同時に行われるタンパク質の取り込みや膜タンパク質の組み込みを担う、小胞体（ER）膜内在性のSec61三量体トランスロコンを構成する小サブユニットであるSec61βをコードします。Sec61βは、リボソームのERへのドッキングを仲介し、シグナル認識粒子（SRP）経路と協調することで、分泌系のプロテオスタシスや、アンフォールドタンパク質応答（UPR）およびER関連分解（ERAD）に結び付くER品質管理プロセスに寄与します。トランスロコン依存的な輸送の乱れは、受容体・チャネル・分泌因子の成熟に影響し得るため、SEC61BはERストレス、プロテオーム不均衡、さらに細胞恒常性を形作る広範な機構の研究において重要です。またSec61複合体は抗原提示や免疫・代謝調節因子の生合成にも関与することから、SEC61Bはストレス適応やタンパク質ハンドリングの表現型を調べる機能ゲノミクススクリーニングで頻繁に解析されています。

Sec61β CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEC61Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sec61β CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEC61B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEC61B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sec61βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEC61B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSec61β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEC61B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSec61β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。