SEC22B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402384-ACT

SEC22B（Sec22 homolog B）は、ER（小胞体）‐ゴルジ体界面に局在し、初期分泌経路における小胞のドッキングおよび膜融合を支えるv-SNAREタンパク質をコードします。t-SNARE複合体とのペアリングを通じて、SEC22Bは順行性および逆行性輸送に寄与し、タンパク質成熟、オルガネラの恒常性、ならびに分泌カーゴの流れを維持します。さらにSEC22Bは、免疫細胞における抗原クロスプレゼンテーションやファゴソームから細胞質への輸送にも関与するとされ、小胞輸送と獲得免疫シグナル伝達を結び付けています。SEC22Bが関与する膜輸送プログラムの破綻は、ERストレス応答やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークに影響し、これらはがん、神経変性、炎症性表現型でしばしば攪乱されています。

SEC22B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEC22Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SEC22B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEC22B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEC22B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SEC22Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEC22B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSEC22B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEC22B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSEC22B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。