Sec15A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405860

Descripción general

EXOC6 codifica Sec15A, un componente central del complejo exocisto octamérico que media el anclaje, regulado espacialmente, de vesículas secretoras a la membrana plasmática antes de la fusión dependiente de SNARE. Sec15A ayuda a acoplar la señalización de las GTPasas de las familias RAB y RHO con la exocitosis polarizada, favoreciendo la entrega de proteínas de membrana, la migración celular, la citocinesis y la polaridad epitelial. A través de su papel en el tráfico vesicular y la remodelación de membranas, EXOC6 es relevante para vías que moldean las uniones célula–célula y el reciclaje de receptores, procesos que con frecuencia se ven alterados en fenotipos celulares proliferativos e invasivos. La desregulación de subunidades del exocisto, incluida Sec15A, se ha asociado en la literatura con programas de secreción y salidas de señalización alterados en contextos relacionados con el cáncer y el neurodesarrollo, lo que convierte a EXOC6 en un objetivo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sec15A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EXOC6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EXOC6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EXOC6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sec15A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EXOC6 para la investigación de la señalización de Sec15A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EXOC6 críticos para la función de Sec15A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EXOC6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sec15A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Sec15A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EXOC6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sec15A (h) y el plásmido HDR Sec15A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EXOC6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EXOC6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.