SEC13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431017

Übersicht

Sec13 kodiert SEC13, einen zentralen Bestandteil des COPII-Hüllkomplexes, der die Frachtauswahl und die Vesikelabschnürung an ER-Austrittsstellen antreibt und so den Transport vom endoplasmatischen Retikulum zum Golgi-Apparat unterstützt. Über seine Funktion im sekretorischen Weg hinaus ist SEC13 an der Architektur des Kernporenkomplexes beteiligt und trägt zur Regulation der zellulären Homöostase bei, indem es über membrantransportabhängige Kontrolle von Proteinlokalisation und -umsatz wirkt. Störungen des SEC13-abhängigen Transports können die Proteostase, Stresssignale und die Koordination des Zellzyklus beeinträchtigen, was Sec13 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen macht, die Sekretion, Membrandynamik und nukleozytoplasmatischen Austausch verbinden. In Mausmodellen sind Sec13-Loss-of-Function-Systeme relevant, um zu untersuchen, wie Transportprozesse und porenassoziierte Mechanismen Entwicklung und krankheitsbezogene zelluläre Phänotypen beeinflussen.

Das SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sec13-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sec13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sec13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEC13-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sec13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEC13-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sec13-Exone abzielen, die für die SEC13-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sec13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sec13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEC13 HDR-Plasmid (m) und SEC13 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sec13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sec13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.