Plasmide CRISPR/Cas9 KO SDHD (h2): sc-403276-KO-2

Présentation

La sous-unité D du complexe succinate déshydrogénase (SDHD) est un composant essentiel d’ancrage membranaire du complexe II mitochondrial, assurant le couplage entre l’oxydation du succinate dans le cycle de l’acide tricarboxylique (TCA) et le transfert d’électrons vers le pool d’ubiquinone de la voie de phosphorylation oxydative (OXPHOS). En soutenant la conversion du succinate en fumarate et le flux de la chaîne respiratoire, SDHD contribue au maintien de l’équilibre rédox mitochondrial, de la production d’ATP et de l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Une perturbation de la fonction de SDHD modifie la signalisation métabolique, notamment la régulation dépendante du succinate des voies sensibles à l’hypoxie, ainsi que des réponses plus larges au stress mitochondrial. La dérégulation de SDHD est impliquée dans des syndromes de prédisposition tumorale héréditaires et sporadiques touchant les lignées neuroendocrines et paraganglionnaires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du métabolisme mitochondrial et d’une signalisation pertinente pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SDHD (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SDHD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SDHD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SDHD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SDHD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SDHD pour l'étude de la signalisation de SDHD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SDHD essentiels à la fonction de SDHD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SDHD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SDHD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SDHD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SDHD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SDHD plasmide HDR (h) et le SDHD (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SDHD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SDHD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.