Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sclerostin (h): sc-401527
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Sclerostin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Sclerostin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sclerostin Antibody (C-11): sc-518161
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sclerostin (h) | sc-401527 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SOST code la sclérostine, une glycoprotéine sécrétée produite principalement par les ostéocytes, qui constitue un régulateur négatif majeur de la formation osseuse. La sclérostine se lie aux corécepteurs LRP5/6 pour antagoniser la signalisation canonique Wnt/β-caténine, modulant ainsi la différenciation des ostéoblastes, le dépôt de la matrice osseuse et le remodelage du squelette. En contrôlant les programmes transcriptionnels induits par Wnt, SOST influence le couplage ostéoblaste–ostéoclaste et l’homéostasie minérale. Une activité de SOST dérégulée est associée à des phénotypes de masse osseuse altérée et est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie de l’ostéoporose, des dysplasies squelettiques et des modifications du remodelage osseux observées dans les troubles inflammatoires et métaboliques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sclerostin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SOST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SOST, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SOST à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sclerostin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SOST pour l'étude de la signalisation de Sclerostin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de SOST essentiels à la fonction de Sclerostin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SOST pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Sclerostin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sclerostin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SOST. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Sclerostin plasmide HDR (h) et le Sclerostin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SOST pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SOST définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.