Plasmide CRISPR/Cas9 KO Scleraxis (m): sc-422833

Présentation

Scx code pour la scléraxine, un facteur de transcription de type hélice–boucle–hélice (bHLH) qui agit comme régulateur déterminant de lignée du développement des tendons et des ligaments. La scléraxine coordonne des programmes d’expression génique de la matrice extracellulaire et la différenciation ténogénique, en intégrant des signaux issus de la mécanotransduction et de voies de facteurs de croissance telles que le TGF-β, ainsi que de réseaux de signalisation apparentés qui façonnent l’identité des fibroblastes et le remodelage de la matrice. Dans des modèles murins, l’activité de Scx est étroitement liée à l’homéostasie des tissus conjonctifs, en influençant l’organisation du collagène, la migration cellulaire et la maturation des tissus au cours du développement et de la réparation. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à Scx est pertinente pour l’étude des tendinopathies, du remodelage matriciel de type fibrotique et des réponses aux lésions musculosquelettiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Scleraxis (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scx dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scx, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scx à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Scleraxis.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scx pour l'étude de la signalisation de Scleraxis, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Scx essentiels à la fonction de Scleraxis
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scx pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Scleraxis plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Scleraxis plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scx. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Scleraxis plasmide HDR (m) et le Scleraxis (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scx pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scx définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.