SART-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407069

Descripción general

DSE codifica la epimerasa de dermatán sulfato, una enzima residente del RE/Golgi que convierte el ácido D‑glucurónico en ácido L‑idurónico en las cadenas de condroitín/dermatán sulfato, moldeando así la estructura de los proteoglucanos y las propiedades de la matriz extracelular (MEC). Al modular la composición de los glucosaminoglucanos, DSE influye en la fibrilogénesis del colágeno, la adhesión célula–matriz y la disponibilidad de factores de crecimiento que pueden afectar programas de señalización como TGF‑β y otras vías sensibles a la MEC. Las alteraciones en la biosíntesis de dermatán sulfato se han vinculado con fenotipos del tejido conectivo y con una remodelación estromal desregulada, y la perturbación de DSE se estudia en contextos que incluyen la fibrosis y la biología del microambiente tumoral. En parte de la literatura, el gen también se menciona bajo el nombre proteico SART‑2, que puede aparecer en estudios de antígenos y de expresión según las convenciones de anotación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SART-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DSE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DSE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DSE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SART-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DSE para la investigación de la señalización de SART-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DSE críticos para la función de SART-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DSE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SART-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SART-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DSE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SART-2 (h) y el plásmido HDR SART-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DSE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DSE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.