SAMD8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416890-ACT

SAMD8（sterile alpha motif domain containing 8）は小胞体に関連する膜タンパク質で、スフィンゴ脂質代謝、特に膜脂質恒常性におけるセラミドとスフィンゴミエリンの相互変換の制御に関与すると考えられています。生理活性スフィンゴ脂質プールを調節するという予測される役割を通じて、SAMD8は小胞体（ER）機能、膜組成、さらにストレス応答や細胞運命決定に結び付く下流のシグナル伝達過程に影響し得ます。スフィンゴ脂質バランスの破綻は、代謝性疾患・炎症性疾患・神経変性疾患の病態や、がん関連の表現型に繰り返し見られる特徴であり、SAMD8は機序解明のための経路研究に有用な結節点となります。SAMD8の発現を調節することで、ヒト細胞系においてER脂質リモデリングが細胞内シグナル伝達およびオルガネラ恒常性とどのように連関するかを検証できます。

SAMD8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SAMD8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAMD8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SAMD8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSAMD8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAMD8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSAMD8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAMD8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSAMD8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAMD8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。