Sam50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427129
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Sam50 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Sam50-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sam50: sc-100493
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sam50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-427129 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Samm50 kodiert Sam50, ein essenzielles β-Fass-Protein der äußeren Mitochondrienmembran, das den Kern des Sorting-and-Assembly-Machinery-(SAM)-Komplexes bildet. Sam50 koordiniert die Biogenese und Membraninsertion von β-Fass-Proteinen und ist funktionell mit den mitochondrialen Proteinimportsystmen verknüpft; dadurch unterstützt es die Organisation der äußeren Membran und die mitochondriale Homöostase. Aufgrund seiner Rolle bei der Aufrechterhaltung der mitochondrialen Architektur, beim Proteinimport und bei atmungskettengekoppelten Prozessen ist eine veränderte SAM-Komplex-Funktion relevant für Studien zu mitochondrialer Dysfunktion, Stresssignalgebung und Signalwegen, die in Modellsystemen mit Neurodegeneration sowie metabolischen Krankheitsphänotypen in Zusammenhang stehen. In Mauszellen wird eine Störung von Samm50 zudem genutzt, um die mitochondriale Qualitätskontrolle zu untersuchen, einschließlich der Wechselwirkungen mit Mitophagie und der Signalgebung der intrinsischen Apoptose.
Das Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Samm50-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Samm50-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Samm50 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sam50-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Samm50-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sam50-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Samm50-Exone abzielen, die für die Sam50-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Samm50-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sam50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Samm50-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sam50 HDR-Plasmid (m) und Sam50 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Samm50-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Samm50-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.