Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404298

概要

SAMM50 は、ミトコンドリア外膜に存在するソーティング＆アセンブリー・マシナリー（SAM）複合体の中核構成因子である Sam50 をコードする。Sam50 は βバレルタンパク質の外膜への挿入と組み立てを促進し、MICOS ネットワークとの相互作用を介してクリステ構造の形成・維持も支える。ミトコンドリア膜のアーキテクチャとプロテオスタシスを保つことで、Sam50 は酸化的リン酸化能、ミトコンドリア動態、そしてエネルギー代謝に結び付いたストレス応答性シグナル伝達に影響を及ぼす。SAMM50 の破綻はミトコンドリア機能不全の表現型と関連し、文献上では代謝形質や神経変性に関連する細胞ストレスとも結び付けられているため、オルガネラの品質管理機構を解明する研究において重要である。さらに SAMM50 は、外膜タンパク質生合成の欠陥がアポトーシス感受性や、ミトコンドリアの攪乱により駆動される自然免疫シグナル伝達にどのような影響を与えるかを検討するための結節点としても用いられる。

Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSAMM50遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SAMM50内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SAMM50のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sam50タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sam50シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SAMM50欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sam50の機能に不可欠なSAMM50エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SAMM50ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SAMM50遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sam50 HDRプラスミド（h）および Sam50 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSAMM50ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSAMM50標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。