Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam50 (h): sc-404298

Présentation

SAMM50 code la protéine Sam50, un composant central du complexe SAM (sorting and assembly machinery) de la membrane externe mitochondriale, qui favorise l’insertion et l’assemblage des protéines à tonneau β et soutient l’organisation des crêtes via des interactions avec le réseau MICOS. En maintenant l’architecture des membranes mitochondriales et la protéostasie, Sam50 influence la capacité de phosphorylation oxydative, la dynamique mitochondriale et les voies de signalisation sensibles au stress liées au métabolisme énergétique. La perturbation de SAMM50 est associée à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial et a été reliée dans la littérature à des traits métaboliques ainsi qu’à un stress cellulaire lié à la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle qualité des organites. SAMM50 est également utilisé comme nœud d’étude pour analyser comment des défauts de biogenèse des protéines de la membrane externe affectent la sensibilité à l’apoptose et la signalisation de l’immunité innée déclenchée par des perturbations mitochondriales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam50 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SAMM50 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SAMM50, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SAMM50 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sam50.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SAMM50 pour l'étude de la signalisation de Sam50, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SAMM50 essentiels à la fonction de Sam50
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SAMM50 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sam50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sam50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SAMM50. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sam50 plasmide HDR (h) et le Sam50 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SAMM50 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SAMM50 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.