SA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423170

Übersicht

Das murine Gen Stag1 kodiert SA-1, eine Kernkomponente des Cohesin-Komplexes, der die Kohäsion von Schwesterchromatiden, die höherstufige Chromatinorganisation sowie die korrekte Chromosomensegregation während Mitose und Meiose steuert. SA-1 trägt zur Genomstabilität und zur Transkriptionsregulation bei, indem es weitreichende Chromatin-Looping-Interaktionen moduliert und DNA-Replikations- und Reparaturprozesse koordiniert. Über diese Funktionen ist STAG1 mit Zellzyklus-Checkpoints und Signalwegen der DNA-Schadensantwort verknüpft und damit relevant für Studien zu Aneuploidie, chromosomaler Instabilität und cohesin-assoziierten Entwicklungsphänotypen. Eine Störung oder Fehlregulation von Cohesin-Untereinheiten, einschließlich SA-1, wird häufig im Zusammenhang mit veränderten Genexpressionsprogrammen und der Tumorbiologie untersucht, ohne dass damit klinische Aussagen impliziert werden.

Das SA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stag1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stag1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stag1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SA-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stag1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SA-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stag1-Exone abzielen, die für die SA-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stag1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stag1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SA-1 HDR-Plasmid (m) und SA-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stag1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stag1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.