RRS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409839

Übersicht

RRS1 (ribosome biogenesis regulator homolog) ist ein konserviertes nukleoläres Protein, das für die Reifung und den Export der 60S-ribosomalen Untereinheit essenziell ist, indem es an der Prozessierung der Prä-rRNA und am Zusammenbau von Vorläufern der großen Untereinheit mitwirkt. Es interagiert mit Faktoren der Ribosomenbiogenese und trägt zur Organisation des Nukleolus bei, wodurch es die Translationkapazität mit Zellwachstum und Zellzyklusprogression verknüpft. Störungen der Ribosomenproduktion können nukleoläre Stress-Signalwege aktivieren und p53-abhängige Checkpoints verändern, was RRS1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Proteostase und Wachstumskontrolle macht. Eine fehlregulierte Kontrolle von Signalwegen der Ribosomenbiogenese, einschließlich Komponenten wie RRS1, ist häufig mit proliferativen Phänotypen assoziiert und relevant für mechanistische Studien in der Krebsbiologie sowie bei verwandten Ribosomopathien.

Das RRS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RRS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RRS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RRS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RRS1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RRS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RRS1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RRS1-Exone abzielen, die für die RRS1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RRS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RRS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RRS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RRS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RRS1 HDR-Plasmid (h) und RRS1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RRS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RRS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.