RPTPα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422515
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- RPTPα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im RPTPα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RPTPα: sc-398203
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RPTPα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422515 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Ptpra kodiert die Rezeptor-Protein-Tyrosinphosphatase alpha (RPTPα), eine transmembrane Phosphatase, die Signalwege moduliert, indem sie inhibitorische Tyrosinreste an Kinasen der Src-Familie und verwandten Substraten dephosphoryliert. Über diese Aktivität beeinflusst sie integrinvermittelte Adhäsion, die Dynamik fokaler Adhäsionen, das Remodeling des Zytoskeletts sowie nachgeschaltete MAPK/ERK-Signalgebung, die gemeinsam Programme für Proliferation, Migration und Differenzierung prägen. RPTPα ist außerdem an Crosstalk mit Rezeptor-Tyrosinkinasen beteiligt und kann Signalschwellen in neuronalen sowie immunbezogenen Kontexten feinjustieren. Eine dysregulierte Ptpra-Signalgebung wurde mit Prozessen in Verbindung gebracht, die für onkogene Transformation und invasives Verhalten relevant sind, was Ptpra zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien des Kinase/Phosphatase-Gleichgewichts in krankheitsassoziierten Signalwegen macht.
Das RPTPα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ptpra-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ptpra-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ptpra nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RPTPα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ptpra-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RPTPα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ptpra-Exone abzielen, die für die RPTPα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ptpra-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom RPTPα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RPTPα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ptpra-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RPTPα HDR-Plasmid (m) und RPTPα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ptpra-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ptpra-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.