Plasmide CRISPR d'Activation (h) ROR1: sc-401841-ACT

Le ROR1 humain (receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1) est un récepteur transmembranaire à passage unique de la famille ROR, impliqué dans la signalisation Wnt non canonique, en particulier dans les voies dépendantes de WNT5A qui régulent la dynamique du cytosquelette, la polarité et la migration dirigée. ROR1 agit comme un échafaudage de signalisation dépendant du contexte, modulant des nœuds en aval tels que les GTPases Rho et des programmes associés aux MAPK, influençant la survie et la motilité cellulaires. Dans les tissus adultes, l’expression de ROR1 est généralement faible, tandis qu’une expression élevée est rapportée dans de nombreux cancers et est associée à des phénotypes invasifs et à des états de différenciation modifiés. Ces propriétés font de ROR1 une cible utile pour étudier la réactivation de signaux du développement, la plasticité épithélio-mésenchymateuse et les dépendances de signalisation des cellules tumorales.

ROR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ROR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ROR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ROR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ROR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ROR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ROR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ROR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ROR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ROR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.