Rootletin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401646

概要

CROCCは、セントロソームに関連する繊毛ルートレットを形成し、セントロソームの結合性（cohesion）および構造的組織化に寄与する、大型のコイルドコイル型細胞骨格タンパク質であるrootletinをコードしている。Rootletinは基底小体の完全性と繊毛形成（ciliogenesis）を支え、セントロソームの構築と微小管の組織化、ならびに細胞周期の進行を結び付ける。CROCCの機能破綻は、繊毛依存性のシグナル伝達ネットワークや有糸分裂の忠実性を乱し得る。これらの過程は、繊毛病、網膜変性、増殖性疾患の機序研究でしばしば検討される。ヒトのセントロソーム構成要素として、rootletinはセントロソーム異常、染色体不安定性、細胞極性に関する研究にも関連する。

Rootletin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCROCC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CROCC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CROCCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rootletinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rootletinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CROCC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rootletinの機能に不可欠なCROCCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CROCCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rootletin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRootletin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CROCC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rootletin HDRプラスミド（h）および Rootletin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCROCCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCROCC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。