ROG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406421

概要

ZBTB32 は転写因子 ROG をコードしており、BTB/POZ ドメインを有する亜鉛フィンガータンパク質として、リンパ球の活性化・分化・エフェクター機能を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。ROG は転写抑制やクロマチン関連の制御を通じて、サイトカイン遺伝子や活性化依存性遺伝子の発現調節に関与し、免疫恒常性および抗原刺激により誘導される応答に関連する経路へ影響を与えます。ヒト免疫細胞では、ZBTB32 活性の変化が炎症性シグナルの破綻や、状況依存的な T 細胞・B 細胞機能の変化と関連することが示されており、免疫介在性疾患の機序研究における重要性が支持されています。調節ノードとしての ZBTB32 は、免疫寛容、免疫疲弊、ならびに刺激応答性の転写リモデリングのモデルで頻繁に研究対象となっています。

ROG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZBTB32遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZBTB32内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZBTB32のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ROGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ROGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZBTB32欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ROGの機能に不可欠なZBTB32エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZBTB32ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ROG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびROG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZBTB32遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ROG HDRプラスミド（h）および ROG HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZBTB32ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZBTB32標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。